تبلیغات
به سوی المپیاد زیست - تعیین توالی پروتئین ها
به سوی المپیاد زیست
بدون عینك كنكور بهbiology فکرکنیم
صفحه نخست       پست الکترونیک          تماس با ما              ATOM            طراح قالب
گروه طراحی قالب من گروه طراحی قالب من گروه طراحی قالب من گروه طراحی قالب من گروه طراحی قالب من
درباره وبلاگ


من دانش آموخته کارشناسی ارشد رشته فیزیولوژی گیاهی از دانشگاه تهران هستم
هدفم در درجه اول ایجاد انگیزه در دانش آموزان رشته تجربی از طریق نگاهی نو به زیست شناسی است و راه اندازی کانونی برای علاقمندان به المپیاد زیست
دوست دارم از همکاران جوان و با انگیزه و آشنا به دانش روز زیست شناسی هم کمک بگیرم.
هیچ انگیزه مادی هم نداشته و ندارم. چون همیشه معتقدم غنی بودن و قانع بودن رمز رسیدن به کمال انسان است.
تا زمانی هم که وقت داشته باشم و دانش اموزان علاقمند هم وجود داشته باشند که منو تشویق کنند ادامه میدم.

مدیر وبلاگ :مدیر جون
مطالب اخیر
نویسندگان
نظرسنجی
نظر شما در باره تشکیل کلاس کنکوری زیست 1 برای سال سومی ها چیه؟ به شرطی که با مطالعه کامل و تست زدن در کلاس حاضر بشن و نکات ترکیبی و مفهومی کار بشه






تعیین توالی امینو اسیدها:

توالی یابی امینو اسید ها در یك نگاه:

بر اساس قانون فاكتوریل،n چیز متفاوت را می توان فاكتوریل !n بار كنار هم قرار داد مثلا با 20 نوع امینو اسید می توان !20 نوع پلی پپتید متفاوت ساخت یعنی 20*1018 نوع پلی پپتید

حالا در نظر بگیرید كه تعداد و نوع امینو اسیدها و تعداد زنجیره های پلی پپتیدی نیز متفاوت هستند و با این حساب تنوع پروتئین ها بسیار بیشتر از عدد فوق خواهد شد.

یكی از فواید تعیین توالی امینو اسید ها در پروتئین ها اینست كه می توان بصورت آزمایشگاهی آنها را سنتز نمود.

روش كار:

1-   ابتدا پس از عصاره گیری از یك بافت،پروتئین ها را از سایر تركیبات با كمك روش های بیوشیمیایی جدا سازی می كنیم.

2-  پروتئین مورد نظر را از مجموع پروتئین ها جدا می كنیم.و بصورت خالص در می آوریم(تخلیص پروتئین)

3- در مورد پروتئین های الیگومر باید رشته های پلی پپتیدی را از هم جدا كرد.

4- تمامی گروههای دی سولفید را احیا كرده و تبدیل به گروههای سولفیدریل می كنیم.

5-  نمونه ای از پلی پپتید مورد نظر را جهت پی بردن به نوع و فراوانی امینو اسیدها بطور كامل هیدرولیز می كنیم.

6- با شناسایی N ترمینال ها و C ترمینال ها اولا تعداد سابیونیت های احتمالی و ثانیا نوع امینو اسید ابتدایی و انتهایی زنجیره را مشخص می كنیم.

7- نمونه دیگری از پلی پپتید را به كمك آنزیم های اختصاصی و روش های بیوشیمیایی دیگر به قطعات كوچكتر هیدرولیز می كنیم و این قطعات كوچك را خالص سازی می كنیم.

8- توالی امینو اسیدی در قطعات كوچك را تعیین می كنیم.

9-  سرانجام با روش overlapping نتایج حاصل از توالی یابی قطعات كوچك را طوری زیر هم می نویسیم كه امینو اسیدهای مشترك در هر قطعه بر هم منطبق شده و حذف شوند.

10-                       پس از تعیین ساختار اول، با شناسایی محل باندهای دی سولفید و تعداد آنها نقشه كامل پلی پپتید را تعیین می كنیم.

 

روش احیایی باندهای دی سولفید:

مركاپتواتانل معروفترین احیا كننده باندهای دی سولفاید است و سپس توسط ید و استات گروههای سولفیدریل، الكیلاسیون می شوند.

روش هیدرولیز كامل:

رشته های پلی پپتیدی جدا شده را به كمك حرارت و یا اسید و یا قلیامی توان بطور كامل هیدرولیز كرد.

مثلا رشته های پلی پپتیدی را در شیشه های دربسته حاوی اسید و یا قلیا بین 10تا 24 ساعت در دمای 100 درجه حرارت می دهند و در صورت آزاد نشدن تمامی امینو اسید ها از آنزیم تریپسین استفاده می شود.

تعیین N ترمینال با روش سنگر(sanger):

دی نیترو فلئوروبنزن كه با عامل آمین واكنش داده  و سپس با هیدرولیز اسیدی تمامی پیوندها بجز همین پیوند شكسته می شوند.سپس با كروماتوگرافی می توان امینو اسید Nترمینال را كه به دی نیترو فلئوروبنزن متصل شده را جداسازی نمود.

البته می توان كار ساده تری انجام داد و از ماده ای فلئورسانس استفاده كرد كه به عامل آمین چسبیده و آنرا ردیابی و شناسایی كرد.

روش ادمن(edman) برای تعیین N ترمینال:

در این روش كه مهمتر و متداولتر است از ماده فنیل ایزوتیوسیانات استفاده می شود كه فقط به گروههای امین انتهایی متصل می شود.


مطالب بیشتر درباره تعیین توالی پروتئین ها:





نوع مطلب :
برچسب ها :
لینک های مرتبط :
          
چهارشنبه 5 آذر 1393
چهارشنبه 1 شهریور 1396 12:41 ب.ظ
This info is priceless. When can I find out more?
چهارشنبه 6 اردیبهشت 1396 06:03 ب.ظ
I know this web page gives quality dependent articles and other material, is there any other site which offers these kinds of
information in quality?
پنجشنبه 6 آذر 1393 01:56 ق.ظ
عاشقشونم !:)
بسی خونده بودمشون...
یادش بخیر.
 
لبخندناراحتچشمک
نیشخندبغلسوال
قلبخجالتزبان
ماچتعجبعصبانی
عینکشیطانگریه
خندهقهقههخداحافظ
سبزقهرهورا
دستگلتفکر





آمار وبلاگ
  • کل بازدید :
  • بازدید امروز :
  • بازدید دیروز :
  • بازدید این ماه :
  • بازدید ماه قبل :
  • تعداد نویسندگان :
  • تعداد کل پست ها :
  • آخرین بازدید :
  • آخرین بروز رسانی :
امکانات جانبی


محمد رضا شجریان » آلبوم غوغای عشقبازان
دایرکتوری تبادل لینک
آگهی